Mi experiencia de investigación durante este semestre

Durante este semestre, ya mi tercero trabajando con el mismo proyecto, he aprendido un poco más a fondo sobre cisplatino, su mecanismo de acción e interacción con otras moléculas. Además  aprendí sobre diversas técnicas de laboratorio y cómo analizar resultados obtenidos de una de estas técnicas, como lo fue 1H RMN.  Claro esta, para lograrlo hizo falta leer mucha literatura relacionada al tema. Una de las cosas que también aprendí  a manejar un poco mejor fue el balance que debe existir entre la investigación, los estudios y demás actividades, y asegurarme de cumplir con todos ellos exitosamente.

Luego del trabajo de este semestre, aún nos falta realizar unos estudios de cinética de reacción con otros compuestos derivados de cisplatino y  hacer un análisis más completo de todos estos experimentos.

Técnicas de laboratorio

En cuanto a las técnicas de laboratorio aprendidas durante la investigación, han sido varias a lo largo de un año y un poco más, ya que cuando comenzé era “prepa” en la materia.

Metro de pH: La técnica más básica fue llevar la solución amortiguadora al pH deseado utilizando metro de pH. Aprendí a calibrarlos bastante bien ya que tomó tiempo acertar por un metro de pH que funcionara adecuadamente porque siempre me tocaban los metros o electrodos dañados. Es muy importante que se sea específico en la medida de pH porque afecta drásticamente los resultados del experimento.

Liofiloización: Esta se utiliza para remover el agua del compuesto o sustancia deseada. El tiempo que tarde dependerá de la cantidad de muestra. El que contiene la muestra se sella con parafina, a esa parafina se le hacen unos pequeños agujeros, el envase se coloca en nitrógeno líquido y luego en el equipo para liofilizar. Yo utilizé el equipo de la Dra. Pastrana, quien puso a liofilizar mis muestras (junto con la técnica de laboratorio) en diversas ocasiones.

“Rotary Evaporation” o evaporación al vacío: Utilicé esta técnica para remover DMF (disolvente) en uno de los pasos de la síntesis de mi compuesto. Es un aparato poco extraño y ruidoso, que tiene que estar bien sellado, asegurarse de que siempre que esté funcionando tenga nitrógeno líquido, y manejarlo con cuidado. Luego de al menos 15 minutos obtendrás tu compuesto, separado del disolvente particular.

Espectroscopía RMN de protón (1D):  Esta técnica es esencial para el proyecto ya que nos permite verificar la pureza del compuesto sintetizado y si realmente  se sintetizó el compuesto deseado. También nos sirve para observar interacciones y hacer estudios cinéticos. Como la mayoría de ustedes ya conoce, básicamente mide giros mágneticos de los átomos. Estas señales obtenidas  en un espectro son integradas poder analizarlas. Para poder hacer esto hay que conocer bien la teoría, tanto cómo analizar un espectro como lo que se espera del espectro (desplazamiento químico y demás). Esta técnica a pesar de que es la más fácil de realizar experimentalemente, es la que más tiempo toma al analizar. La paciencia y amabilidad  de Aracelis Cardona (técnica) y el programa MestreC facilitan un poco esta tarea.

COSY (COrrelated SpectroscopY) (2D):  Técnica que correlaciona las señales de los espectros obtenidos al mostrarlos en dos dimensiones. Al correlacionar las señales nos permite saber cuales de todas las señales  estan relacionadas unas con otras (que señales serían “vecinos” inmediatos en una molécula o complejo). Hasta ahora es la técnica que más complicada se me ha hecho analizar.

Actualización

Desde el último post no hemos logrado analizar apropiadamente los resultados de las interacciones estudiadas, por la falta de un programa utilizado para integrar las señales de los espectros (MestreC). Sí logramos hacer la misma interacción entre GSH, GMP, Ala pero con otros dos complejos: cisplatino, para utilizarlo como “control” y otro derivado de cisplatino cisPt-5-metiltiazol.

Visita a Bioblogs

Al visitar los blogs de algunos de mis compañeros de BioMINDS observé cuán distintos pueden ser los proyectos de cada auno de nosotros, aunque todos directa o indirectamente relacionados de alguna manera. En los blogs que logré visitar habían interesantes proyectos de ecología, microbiología y bioingeniería. Cuando comenzé a leer el de bioingeniería, me pareció curioso que el estudiante es de ingeniería mecánica y de momento no lo relacionaba con biología. Al leer sobre el proyecto me dí cuenta de la importancia y aplicaciones de estas y otras disciplinas en el área de biología.

Fotos del Equipo de Trabajo

Profa. Mayra Cádiz, Química Inorgánica. 
 
Equipo de Trabajo
 
 De izquierda a derecha: Rocío, Iriselies, Lillibeth, Leyre, Magdelisse, Jetsy. 

Hasta el momento

Durante este pasado mes hemos realizado las pruebas de 1H NMR, COSY y TOCSY a la interacción entre glutationa reducida (GSH), alanina y el compuesto sintetizado derivado de platino (cisPt-tz).  Otra compañera estaba estudiando esta misma interacción pero usaba Guanosina Monofosfatada (GMP) en lugar de GSH. Aún no se han analizado adecuadamente los resultados, pero al parecer cisPt-tz esta interaccionando como se esperaba. Esta semana pasada se estudió la competición entre GMP y GSH con cisPt-tz, bajo las mismas condiciones. Los resultados serán analizados durante esta semana entrante, con la esperanza de observar los resultados esperados: GSH interaccionará más rápidamente, en comparación con GMP.

Realizar estos tres experimentos presentaron algunas dificultades porque el TOCSY no brindó la información que esperábamos.  En adición a esto, en especial el último experimento, requirió mucha coordinación entre las dos compañeras que trabajamos en este experimento, la profesora, y Aracelis Cardona (encargada de realizar los estudios). Fue por esta razón que tal vez tomó más del tiempo esperado para realizarlo, había que esperar para utilizar el equipo, al igual que los resutlados de un experimento para saber si habría que hacer algún ajuste al próximo.

 Considero que la disposición, la buena actitud y relación entre todas las personas que trabajamos para hacer este  experimento fue clave para el éxito del mismo.

Investigación

En el RUM trabajo con la Dra. Mayra E. Cádiz en el área de química inorgánica y bioquímica.  Nuestro equipo de trabajo se compone de siete personas, aunque cada una con algún proyecto específico todos se complementan.  El propósito general es sintetizar compuestos derivados de cisplatino, droga utilizada como anticarcinógeno, para luego caracterizarlos y comprobar su efectividad. Este ya sería mi tercer semestre trabajando en este laboratorio. En primer lugar sinteticé un compuesto, lo caractericé mediante análisis elemental, espectroscopía ¹H RMN y UV. El semestre pasado analizamos su interacción con glutationa reducida simulando condiciones fisiológicas. Este semestre analizaremos esta misma interacción y su competición con otro complejo derivado de cisplatino. Además se realizará un COSY y TOCSY para observar mejor los resultados.  Como se pueden imaginar he tenido que leer mucho sobre estos temas para poder comprender y analizar mejor el experimento. La mayoría de la literatura requerida para hacer esto ha sido provista  y explicada paso por paso por la profesora. En general, esta experiencia ha sido muy buena y enriquecedora porque he aprendido sobre el tema, las técnicas, equipo y procedimiento utilizado. En adición a esto he aprendido y confirmado que el trabajar en equipo es esencial para alcanzar un trabajo exitoso y ayuda a crear nuevas amistades.